فهرست مطالب

نشریه پژوهش هایی در کشت سلول و بافت کاریوتیک
سال یکم شماره 1 (تابستان 1399)

  • تاریخ انتشار: 1399/06/01
  • تعداد عناوین: 7
|
  • علیرضا ایرانبخش صفحه 0
  • عباس زارع میرک آبادی*، پروین حریه صفحات 1-8
    پیشینه مطالعه و هدف

    مارهای جعفری دارای اندازه کوچک هستند و جزو مارهای مهاجم بسیار گزنده محسوب می شوند. زهر مار نوع تغییر شکل یافته بزاق دهان مار است که از طریق غدد بزاقی تغییر شکل یافته ترشح می شود و در کیسه سم ذخیره می شود. از مشکلات جوامع بشری به ویژه در مناطق روستایی گزش توسط مارهای سمی است که به طور صحیح و به موقع درمان نمی شوند. هدف از این مطالعه بررسی میزان سمیت مار جعفری ایرانی بر رشد سلولی و مکانیسم دخیل در آن است.

    روش مطالعه

    در این پژوهش به بررسی اثرات سمیت زهر مار جعفری ایرانی (Echis carinatus sochureki) بر میزان بقا و رشد رده سلولی فیبروبلاست پوست انسانی (HDF) با استفاده از میکروسکوپ اینورت (Inverted)، آزمون MTT و نوترال رد (NR) و همچنین سنجش میزان آنزیم لاکتات دهیدروژناز (LDH) پرداخته شد.

    نتایج

    سنجش سمیت با آزمون MTT و نوترال رد نشان داد غلظت 80 میکروگرم بر میلی لیتراز بزاق مار بقای سلول های HDF در مقایسه با کنترل کاهش می دهد و با افزایش غلظت بزاق مار میزان سمیت سلولی افزایش می یابد که وابسته به غلظت است (001/0p <). همچنین میزان آزاد سازی LDH با افزایش غلظت بزاق مار افزایش یافت (001/0p <) و تغییرات شاخصی در شکل سلولی مشاهده گردید.

    نتیجه گیری

    بزاق مار جعفری در غلظت های بالا بر روی سلول های فیبروبلاست پوست موجب القای سمیت می گردد و مهار تکثیر سلولی احتمالا از طریق فرآیند القا نکروز می باشد. نتایج بدست آمده از این تحقیق برای پژوهش های بعدی در این زمینه و همچنین روش های درمانی برای مارگزیدگان مفید خواهد بود.

    کلیدواژگان: سلول های فیبروبلاست پوست انسانی (HDF)، سم مار جعفری (Echis carinatus sochureki)، نکروز، LDH، NR
  • سعید ذاکر بستان آباد*، سهیلا درمانلو، سمیه درمانلو صفحات 9-15
    مقدمه و هدف

    سقط خود بخودی طبق تعریف سازمان بهداشت جهانی ختم حاملگی یا تولد نوزاد کمتر از 500 گرم قبل از هفته بیستم و دو حاملگی تعریف شده است. عوامل مختلفی می تواند موجب سقط مکرر گردد. از جمله علل ژنتیکی می توان به تاثیر برخی از پلی مورفیسم های ژنتیکی اشاره نمود. ژن فاکتور رشد اپیتالیوم عروقی (VEGF) از جمله ژن های کلیدی و مهم در رگ زایی است. متیلین تتراهیدروفولات دهیدروژناز سیکلوژناز و فورمیل تتراهیدرو فولات سنتتاز I (MTHFD1) در متابولیسم فولات نقش دارد. هدف از این تحقیق بررسی پلی مورفیسم ژنVEGF وMTHFD1 در ارتباط با سقط مکرر خود به خودی در زنان شهر تهران می باشد.

    روش مطالعه

    از 50 زن مبتلا به بیماری سقط مکرر و 10 زن سالم بدون سابقه سقط نمونه خون جمع آوری شد. DNA ژنومی از لوکوسیت های خون محیطی استخراج گردید. پلی مورفیسم ژنVEGF rs3025039 وMTHFD1 rs2236225 باPCR بررسی و به وسیله الکتروفورز ژل آگارز مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. آنالیز آماری توسط نرم افزار FinchTV انجام شد.

    نتایج

    فراوانی ژنوتیپ های CC و CT برای جهش rs2236225 VEGFA به ترتیب در گروه بیمار 86% و 14% و در گروه کنترل پلی مورفیسم 90% و 10% بود. فراوانی ژنوتیپ های GGو GA برای جهش rs3025039 MTHFD1 به ترتیب در گروه بیمار 82% و 18% بود و و در گروه کنترل پلی مورفیسم دیده نشد.

    نتیجه گیری

    نتایج نشان داد که بین پلی مورفیسم VEGFA و MTHFD1 با سقط مکرر رابطه معنادار وجود دارد. مطالعه پلی‎مورفیسم ژن MTHFD1 در جمعیت ها می تواند به عنوان مارکر تشخیصی در استعداد ابتلا به سقط مکرر باشد.

    کلیدواژگان: سلول های خون، سقط خودبخودی، پلی مورفیسم، MTHFD1، VEGFA
  • آنی دژاکام، پیمان حسنی ابهریان*، آزاده حکمت صفحات 16-25
    پیشینه مطالعه و هدف

    اعتیاد به تریاک در جامعه بسیار ایرانی شایع است . در طی دو دهه گذشته، در کنگره 60 که یک سازمان غیر دولتی است، روش درمان تدریجی تریاک (DST) که مرتبط با کلاس های گروهی درمان های روانشناختی است اجرا شده است . اثر بخشی متد کاهش تدریجی تریاک، تایید شده است . اما مکانیسم های مولکولی این روش درمان اعتیاد به طور کلی روشن نشده است . ژن BDNF فاکتور نوروتروفیک مشتق گرفته از مغز است که با چندین مکانیسم مولکولی مغز شامل حافظه مرتبط است.

    روش مطالعه

    ابتدا نمونه های سلول های خون از 21 نفر از بیماران مراجعه کننده به مرکز ترک اعتیاد کنگره شصت قبل و بعد از 5 ماه درمان تهیه شد. RNA استخراج شده از هر نمونه به وسیله روش RT به cDNA تبدیل و با استفاده از آغازگرهای اختصاصی برای ژن BDNF، تکثیر گردید؛ همچنین تولید درون سلولی پروتئین BDNF به وسیله روش وسترن بلات مورد بررسی قرار گرفت.

    نتایج

    کاهش قابل توجه بیان ژن BDNF در دربیماران معتاد در مقابل افراد سالم نشان داده شد . همچنین به طور قابل ملاحظه ای افزایش بیان ژن BDNF در بیماران بعداز 5 ماه دوره درمانی مشاهده شد (01/0>p). بنابراین سوء مصرف مواد و روش درمان تدریجی بر روی بیان BDNF اثر می گذارد .

    نتیجه گیری

    مطالعات حاضر می تواند به فهم بهتر مکانیسم های نورولوژیکی و مولکولی تریاک و روش درمان تدریجی کمک نماید . همچنین BDNF به عنوان مارکرهای بالقوه برای آزمایش و اثر بخشی انواع مختلف درمان اعتیاد باشد.

    کلیدواژگان: سلول های خون، مارکر مولکولی، درمان تدریجی، ژن Real-time PCR، BDNF
  • مینو شاهانی*، فریده فیروزی صفحات 26-33
    پیشینه مطالعه و هدف

    سرطان پستان شایع ترین سرطان در بین زنان ایرانی و جهان می باشد و در حال حاضر به عنوان دومین سرطان بدخیم بعد از سرطان ریه در زنان به شمار می آید. هدف از رادیوتراپی (پرتو درمانی) از بین بردن حد اکثرسلول های سرطانی با حداقل آسیب به بافت های سالم است. از روش رادیوتراپی حین عمل جراحی (IORT) می توان به طور دقیق و کنترل شده برای درمان ناحیه ی کوچکی از بافت، بدون آسیب به بافت و اندام های اطراف استفاده نمود. در این روش در اثر آسیب DNA و شروع روند آپوپتوز، سلول های ناحیه ی درمان (بافت هدف) تخریب و ادامه ی رشد و تقسیم غیر ممکن می شود.

    روش مطالعه

    در این مطالعه، چهار نمونه از بافت پستان بعد از پرتو دهی از بیماران که با 21 گری اشعه تحت عمل جراحی پستان بودند بدست آمد. ژل الکتروفورز دوبعدی (2D-PAGE) و نرم افزار Progenesis Same Spots v3.2 جهت بررسی تغییر بیان پروتئین های قبل از پرتودهی و بعد از پرتودهی استفاده شد.

    نتایج

    تقریبا 523 لکه بر روی ژل الکتروفورز دو بعدی مشخص شد. 343 لکه با بیان متفاوت که دارای پارامترهای آماری معنادار (05/0P <) بودند تعیین شد. از این مقدار 144 لکه کاهش در بیان داشت و 179 لکه افزایش در بیان داشت.

    نتیجه گیری

    نتایج نشان داد که Caspase3، BCL، BAX، BID و P53پروتئین های کلیدی هستند که پس از استفاده از پرتودهی حین درمان در بافت تغییر می کنند.

    کلیدواژگان: سرطان پستان، رادیوتراپی، پروتئومیکس، الکتروفورز دو بعدی، آپوپتوز
  • بهاره نوروزی* صفحات 34-44

    سیانوباکتری ها، موجودات میکروسکوپی دارای ویژگی های مشابه با پروکاریوت ها و یوکاریوت ها هستند که امروزه در تحقیقات بیوتکنولوژی بسیار مطرح هستند و قادرند طیف وسیعی از ترکیبات آلی بسیار ارزشمند را تولید نمایند. با این حال هنوز گروه کثیری از سویه های سیانوباکتری ها در ایران ناشناخته باقی مانده اند، گروهی که به آب های شیرین (برکه و آبگیر یا چشمه و نهر) اختصاص دارند و گروهی که به زیستگاه های خشکی مربوط هستند، این امر در بسیاری از موارد به دلیل این است که روش های کشت و پرورش اختصاصی سویه های سیانوباکتری ها به درستی شناخته نشده است. در واقع کشت سویه های سیانوباکتری های خالص شده و آکزنیک، فاقد هر گونه باکتری و پاتوژن دیگر، امکان انجام بسیاری از فعالیت های پژوهشی را در زمینه های مختلف ژنتیکی و مولکولی فراهم خواهد آورد. در این مقاله با هدف آشنایی با محیط کشت های مختلف برای انواع سویه های سیانوباکتری ها، روش درست و دقیق جداسازی، کشت و خالص سازی سیانوباکتری های آبزی و خاکزی توضیح داده خواهد شد.

    کلیدواژگان: سیانوباکتری، کشت، آبزی، خاکزی
  • روزبه فلاحی* صفحات 45-51

    کشت های سلولی، خصوصا کشت های پرایمری، کاربرد وسیعی در جداسازی و شناسایی ویروس ها دارند. ویروس ها از مهم ترین عوامل بروز بیماری ها و ایجاد خسارات اقتصادی هنگفت هستند. همچنین جهت تحقیقات پایه در فیزیولوژی سلولی، ژنتیک و بسیاری از موارد دیگر مورد استفاده قرار می گیرند. کشت های سلولی پرایمری، همچنین در تحقیقات کروموزومی در مورد کاریوتایپ، مورفولوژی و حالات غیرطبیعی کروموزوم ها مورد استفاده قرار می گیرند. تهیه کشت سلولی پرایمری، در موجودی نظیر زنبور عسل که تاکنون تیره سلولی از آن تهیه نشده، کاربرد وسیعی در جداسازی و شناسایی ویروس ها دارد. کشت های سلولی پرایمری همچنین مقدمه ای برای تولید تیره های سلولی می باشند. در زمینه کشت سلولی زنبور عسل تحقیقات در اغلب کشورها محدودتر از سایر حشرات بوده ولی در سال های اخیر نتایج خوبی در این زمینه بدست آمده است. در ایران نیز نتایج مطلوبی از تهیه کشت پرایمری از مرحله لاروی و شفیرگی زنبور عسل بدست آمده که در این خصوص حایز اهمیت می باشد. از آنجاییکه گزارشاتی از بیماری های ویروسی مهم زنبور عسل در ایران وجود دارد، این مقاله به معرفی روش های تهیه کشت سلولی زنبور عسل و نتایج بدست آمده در ایران و سایر کشور ها پرداخته است که می توان در مواقع لزوم نسبت به جداسازی ویروس های مورد نظر و مطالعات مرتبط بر روی آنها اقدام نمود.

    کلیدواژگان: کشت سلولی، زنبور عسل، کاربرد کشت سلول، تهیه کشت سلول
|
  • Alireza Iranbakhsh Page 0
  • Abbas Zare Mirakabadi *, Parvin Horrieh Pages 1-8
    Introduction and Aim

    Echis carinatus are small in size and are considered to be very biting invasive snakes. Snake venom is a type of snake saliva that is secreted through the salivary glands and stored in the venom sac. A problem in human societies, especially in rural areas, is snake bites, which are not treated properly. The aim of this study is evaluation of toxicity of saliva of Echis carinatus sochureki on cells growth and the mechanisms involved.

    Methods

    In this study, the effect of Echis carinatus sochureki saliva on human dermal fibroblasts (HDF) cells growth was determined by the inverted microscope, MTT assay, and Neutral red assay. The integrity of the cell membrane through LDH release was also measured.

    Results

    The MTT assay and Neutral red assay showed a significant (p < /em>˂0.001) cytotoxic effect of Echis carinatus sochureki salvia on HDF cells growth after 24 hours treatment. Also, Echis carinatus sochureki venom caused a significant (p < /em>˂0.001) increase in LDH release. Various morphological abnormalities were observed in cells.

    Conclusion

    The Echis carinatus sochureki saliva causes cytotoxic effects on HDF cells by the necrotic mechanism. The results of this study will be useful for future research in this field, as well as therapeutic methods for snake bites.

    Keywords: Human dermal fibroblasts (HDF), Echis carinatus sochureki, Necrosis, LDH, NR assay
  • Saeed Zaker Bostanabad *, Soheila Darmanlo, Somayeh Darmanloo Pages 9-15
    Introduction and Aim

    According to the WHO definition, recurrent miscarriage is a consecutive pregnancy loss before weeks 22. Different factors involved in recurrent abortion as a multifactorial disease. Genetic factors are one of the important factors associated with recurrent abortion. VEGFA (Vascular Endothelial Growth Factor A) is one of the important gene in angiogenesis. MTHFD1 (Methylenetetrahydrofolate Dehydrogenase, Cyclohydrolase, And Formyltetrahydrofolate Synthetase 1) is a protein-coding gene that metabolism folate. The goal of this article is to assess the association between single nucleotide polymorphisms of VEGFA and MTHFD1 and the recurrent miscarriage in Iranian women.

    Material and method

    The study group was 50 women with recurrent miscarriages and the control groups consisted of 10 women with at least two successful pregnancies and no miscarriages. The DNA extracted from leucocytes cells. PCR was used to find the association between VEGFA and MTHFD1 genes and recurrent miscarriages. Analyzing performed with FinchTV software after data sequencing.

    Result

    Our results showed that the polymorphism frequency of CC and CT in rs2236225 VEGFA were 86% and 14% in women with recurrent miscarriages and 90% and 10% in the control group. the polymorphism frequency of GG and GA in rs3025039MTHFD1 were 82% and 18% in women with recurrent miscarriages and no polymorphism was detected in the control group.

    Conclusion

    These results showed that there is an association between single nucleotide polymorphisms of VEGFA and MTHFD1 and the recurrent miscarriage in Iranian women. Furthermore, MTHFD1 polymorphism could be a molecular marker in the diagnosis of recurrent miscarriage.

    Keywords: Blood Cells, Spontaneous abortion, Polymorphism, MTHFD1, VEGFA
  • Ani Dejakam, Azadeh Hekmat Pages 16-25
    Introduction and Aim

    Opium addiction is one of the most prevalent addiction in Iranian society. Throughout the last two decades, congress 60; a nongovernmental organization; has been operated a taper off treatment of opium associated with a package of psychological treatment group classes. Although the effectiveness of the taper off method in opium addiction has been verified, molecular mechanisms involved in this treatment have not explained. BDNF gene is a brain-derived neurotrophic factor that is associated with numerous molecular mechanisms of the brain including memory.

    Methods

    In this research, peripheral blood samples from 21 patients were collected from Congress 60. RNA was extracted from each sample, reverse transcribed and amplified via RT-PCR technique, utilizing specific primers for BDNF. The production of BDNF protein was also analyzed employing the western blotting technique.

    Results

    Our results exhibited considerable down expression of BDNF in addict persons vs. non-psychiatric persons (p < /em><0.01). Furthermore, BDNF expression levels in addicts increased significantly after the therapy period. Findings showed the effect of opium abuse and taper off treatment on the expression of BDNF.

    Conclusion

    The present study could help to a better understanding of molecular and neurological mechanisms of opium and taper off treatment. Additionally, BDNF level detection could be a potential marker for screening the effectiveness of various types of addiction treatment.

    Keywords: Blood Cells, Molecular Marker, Taper off Treatment, BDNF gene, Real-time PCR
  • Minoo Shahani *, Farideh Firouzi Pages 26-33
    Introduction and Aim

    Breast cancer is the most common cancer among Iranian women and women in the world. The aim of radiotherapy (radiation therapy) is to eliminate the maximum of cancer cells with minimal damage to healthy tissue. Intraoperative radiation therapy (IORT) can be utilized to treat a small area of tissue without any damages. In this method, because of DNA damage and initiation of the apoptosis process, the tumor cells (target tissue) are destructed.

    Methods

    Four Breast Cancer (BC) patients as a pilot study were treated by 21 Gy (Radical dose). Two-dimensional electrophoresis (2D-PAGE) and Progenesis Same Spots v3.2 were performed to study the proteomic of the IORT-treated tumor bed.

    Results

    Approximately 523 protein spots were detected. A total of 343 protein spots showed different expression. among which, 141 spots decrease in-expression level, while, the remaining 191 spots were up-regulated.

    Conclusion

    Our findings indicate that Caspase3, P53, BID, BAX, and BCL2 may be key proteins in the IORT-treated tumor bed.

    Keywords: Breast cancer, Radiation therapy, proteomics, Two-dimensional electrophoresis, Apoptosis
  • Bahareh Nowruzi * Pages 34-44

    Cyanobacteria, microscopic organisms have similar characteristics to prokaryotes and eukaryotes, which are very popular in biotechnology research today and are able to produce a wide range of highly valuable organic compounds. However, many strains of cyanobacteria still remain unknown in Iran, a group that is dedicated to freshwater (ponds or springs and streams) and a group that is related to terrestrial habitats. This is in many cases due to the fact that the specific cultivation methods of cyanobacterial strains are not well known. In fact, culturing the strains of axenic cyanobacteria, free of any bacteria or other pathogens, will allow many research activities to be performed in various genetic and molecular fields. In this article, in order to get acquainted with different media cultures for different types of cyanobacterial strains, the correct and accurate method of isolation, cultivation and purification of aquatic and terrestrial, cyanobacteria will be explained.

    Keywords: Cyanobacteria, Culturing, Aquatic, Terrestrial
  • Roozbeh Fallahi * Pages 45-51

    The cell cultures, especially primary cultures, are widely used in the isolation and identification of viruses. Viruses are one of the most important causes of disease and can cause enormous economic damage. Also, they are used in basic research in cell physiology, genetics, and many other items. Primary cell cultures are also used in chromosomal research on karyotypes, morphology, and abnormal states of chromosomes. Primary cell culture preparation, such as bees that have not yet been derived from the cell line, is widely used in the isolation and identification of viruses. In the field of honey bee cell culture, the research in most countries is more limited than other insects but in recent years, good results have been achieved in this field. There are some good results about the larval and pupal stages of the honey bee primary culture in Iran. Since there are some reports about the influence of honey bee in viral investigation in Iran, this article introduces methods of bee cell culture preparation and the results obtained in Iran and other countries that can use to isolate viruses and study them when necessary.

    Keywords: Cell culture, Honey bee, Application of cell culture, Preparation of cell culture